Plásmido CRISPR de Activación (m) ASB-2: sc-425766-ACT

El gen Asb2 de ratón codifica ASB-2, una subunidad de reconocimiento de sustratos que contiene un dominio SOCS box de los complejos de ligasa E3 de ubiquitina Cullin5/Rbx2, y que ayuda a dirigir proteínas específicas hacia la ubiquitinación y su degradación por el proteasoma. ASB-2 está implicada en la regulación de programas de diferenciación hematopoyética y mieloide al modular la estabilidad de efectores de señalización y transcripcionales que controlan el compromiso de linaje y la maduración celular. Mediante la proteostasis dependiente de ubiquitina, ASB-2 contribuye a vías que gobiernan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. La actividad desregulada de ASB-2 y el desequilibrio de las ligasas de ubiquitina son ampliamente relevantes para estudios de mecanismos de enfermedades hematológicas, estados inflamatorios y biología del cáncer, donde las redes de degradación proteica influyen en el destino celular.

ASB-2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Asb2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ASB-2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Asb2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Asb2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ASB-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Asb2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ASB-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ASB-2 en células tumorales con expresión de Asb2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.