Plasmide Double Nickase (h) ARSA: sc-404921-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ARSA correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ARSA Double Nickase (h) et le plasmide ARSA Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ASNA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ARSA Antibody (H-7): sc-390568
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ARSA | sc-404921-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ARSA | sc-404921-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ARSA (arylsulfatase A) humaine est une sulfatase lysosomale qui hydrolyse le cérébroside 3‑sulfate (sulfatide), soutenant le renouvellement des sphingolipides et l’homéostasie lipidique de la myéline. En s’intégrant aux voies cataboliques lysosomales et au trafic endolysosomal, l’ARSA contribue à réguler la composition membranaire et à prévenir l’accumulation de sulfatide dans les cellules neurales et gliales. La perte d’activité de l’ARSA est associée à une altération de la fonction lysosomale et à la pathologie démyélinisante observée dans la leucodystrophie métachromatique, ce qui fait de l’ARSA une cible largement utilisée pour étudier la biologie des maladies de surcharge lysosomale et la dérégulation lipidique liée à la neurodégénérescence. La perturbation de l’ARSA est également pertinente pour examiner comment les métabolites des sphingolipides influencent l’inflammation, les réponses cellulaires au stress et la viabilité neuronale.
ARSA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ASNA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ASNA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ASNA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ASNA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.