Plásmido CRISPR de Activación (h) Arrestin-C: sc-403284-ACT

ARR3 codifica la arrestina-C, una arrestina enriquecida en los fotorreceptores tipo cono, que se une a las opsinas fosforiladas activadas por la luz para terminar la señalización mediada por proteínas G y facilitar la desensibilización del receptor dentro de la cascada de fototransducción. Al regular la desactivación de los GPCR y el tráfico de receptores, la arrestina-C ayuda a determinar la amplitud de la señal y la cinética de recuperación en los conos de la retina, y contribuye a la adaptación visual. La desregulación de la señalización de GPCR en conos y del apagado mediado por arrestina se ha relacionado con disfunción retiniana, lo que convierte a ARR3 en un punto de entrada molecular útil para estudiar las interacciones entre arrestina y GPCR y el control específico de la señalización en conos. ARR3 también ofrece un modelo manejable para desentrañar procesos dependientes de arrestina en la biología de cilios/segmento externo y en la señalización de neuronas sensoriales.

Arrestin-C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARR3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Arrestin-C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARR3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARR3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Arrestin-C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARR3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Arrestin-C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Arrestin-C en células tumorales con expresión de ARR3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.