Arrestin-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403284-ACT

ARR3 codifica a arrestina-C, uma arrestina enriquecida em fotorreceptores cones que se liga a opsinas fosforiladas e ativadas pela luz para terminar a sinalização de proteínas G e facilitar a dessensibilização do receptor na cascata de fototransdução. Ao regular a desativação de GPCRs e o tráfego de receptores, a arrestina-C ajuda a moldar a amplitude do sinal e a cinética de recuperação nos cones da retina e sustenta a adaptação visual. A desregulação da sinalização de GPCRs nos cones e do “desligamento” mediado por arrestina tem sido associada à disfunção retiniana, tornando o ARR3 um ponto de entrada molecular útil para estudar interações entre GPCRs e arrestinas e o controle específico da sinalização em cones. O ARR3 também fornece um modelo acessível para dissecar processos dependentes de arrestina na biologia de cílios/segmento externo e na sinalização de neurônios sensoriais.

Arrestin-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARR3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Arrestin-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARR3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Arrestin-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARR3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Arrestin-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Arrestin-C em células tumorais com expressão de ARR3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.