Arnt 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403101-ACT

ARNT2 (Aryl-Hydrocarbon-Rezeptor-Nukleartranslokator 2) kodiert einen basischen Helix-Loop-Helix-PAS-Transkriptionsfaktor, der mit PAS-Domänen-Partnern heterodimerisiert, um Umwelt- und Entwicklungsreize mit Genexpressionsprogrammen zu verknüpfen. Als nuklearer Translokator ist ARNT2 an sauerstoff- und xenobiotika-reaktiven Transkriptionsnetzwerken beteiligt und integriert Signale, die die neuronale Differenzierung, metabolische Anpassung und zelluläre Stressantworten prägen. Die durch ARNT2 regulierte Transkription steht mit Signalwegen in Zusammenhang, die die hypoxieabhängige Genexpression und neuroentwicklungsbezogene Musterbildung steuern, und ist relevant für Erkrankungen, bei denen die neurale Genregulation und Stresssignalgebung verändert sind. Eine Fehlregulation der ARNT2-Aktivität wurde zudem im Kontext von „Pathway Rewiring“ bei Krebs und anderen Krankheiten untersucht, bei denen die bHLH-PAS-Transkriptionskontrolle den Zellzustand sowie Überlebensprogramme beeinflusst.

Arnt 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ARNT2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Arnt 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ARNT2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ARNT2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Arnt 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ARNT2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Arnt 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Arnt 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ARNT2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.