Plasmide CRISPR d'Activation (h) ARMER: sc-409837-ACT

L’ARL6IP1 humain code ARMER, une protéine membranaire localisée au réticulum endoplasmique (RE) impliquée dans le maintien de l’homéostasie du RE et la régulation de la mort cellulaire programmée. ARMER participe aux réponses au stress du RE et relie la dynamique des membranes du RE à la signalisation apoptotique, influençant l’adaptation cellulaire au stress protéotoxique. Une expression dérégulée d’ARL6IP1 a été associée à des modifications des voies de signalisation de survie et à des phénotypes de tolérance au stress décrits dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, notamment en cancérologie et en neurobiologie. Par conséquent, ARMER est fréquemment étudiée dans les voies qui gouvernent la fonction du RE, l’apoptose induite par le stress et les décisions de destinée cellulaire.

ARMER Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARL6IP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ARMER Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARL6IP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARL6IP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ARMER. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARL6IP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ARMER au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ARMER dans les cellules tumorales présentant une expression de ARL6IP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.