ARL4D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406905

Übersicht

ARL4D (ADP-Ribosylierungsfaktor-ähnliche GTPase 4D) ist ein kleines, ARF-ähnliches GTP-bindendes Protein, das zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen zyklisch wechselt, um Membrantransport und Umgestaltung des Zytoskeletts zu koordinieren. Es wird mit der Regulation der Aktindynamik, des vesikulären Transports und der räumlich begrenzten Signalübertragung an Zellmembranen in Verbindung gebracht – Prozesse, die Zellform, Polarität und Motilität beeinflussen. Die ARL4D-Aktivität überschneidet sich mit von kleinen GTPasen gesteuerten Signalwegen, die die Rekrutierung von Effektoren an Membranen und die Organisation von Transportwegen regulieren. Veränderte ARL4D-Expression oder -Signalgebung wurde im Zusammenhang mit fehlregulierter Proliferation und Migrationsphänotypen untersucht, die für die Onkologie und andere Erkrankungen mit gestörter Membrandynamik relevant sind.

Das ARL4D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ARL4D-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ARL4D-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ARL4D nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ARL4D-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ARL4D-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ARL4D-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ARL4D-Exone abzielen, die für die ARL4D-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ARL4D-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ARL4D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ARL4D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ARL4D-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ARL4D HDR-Plasmid (h) und ARL4D HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ARL4D-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ARL4D-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.