Plásmido Doble Nickase (h) Arkadia: sc-403319-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Arkadia consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Arkadia (h) y el plásmido de doble nickasa Arkadia (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RNF111. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Arkadia Anticuerpo (1-KK14): sc-134270
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Arkadia | sc-403319-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Arkadia | sc-403319-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF111 codifica Arkadia, una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING que regula la proteostasis y la transcripción dependiente de señales al dirigir sustratos específicos a su degradación mediada por ubiquitina. Arkadia es un modulador clave de la señalización TGF-β/SMAD, ya que potencia la salida de la vía mediante la ubiquitinación de reguladores negativos e influye en procesos como la transición epitelio-mesénquima, la determinación del destino celular y la homeostasis tisular. A través de su control de programas transcripcionales y de la estabilidad proteica, RNF111 se ha investigado en contextos que incluyen la biología tumoral, la regulación del desarrollo y la señalización relacionada con el sistema inmunitario. La desregulación de la ubiquitinación dependiente de Arkadia puede alterar la actividad de SMAD y la expresión génica aguas abajo, lo que convierte a RNF111 en un nodo útil para estudiar el “rewiring” de la vía en modelos celulares relevantes para enfermedades.
Arkadia El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RNF111 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RNF111. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RNF111. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RNF111 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.