ARK-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423197

Descripción general

Aurkb (ARK-2) codifica una quinasa de serina/treonina que funciona como el núcleo catalítico del complejo pasajero cromosómico, coordinando la condensación de los cromosomas, la corrección de errores en la unión cinetocoro–microtúbulo y la citocinesis. La actividad de ARK-2 se regula a lo largo de la mitosis mediante señalización dependiente de fosforilación y una relocalización espacial desde los centrómeros hasta la zona media del huso, acoplando la satisfacción del punto de control de ensamblaje del huso con una segregación cromosómica fiel. La alteración de Aurkb perturba la dinámica de la cromatina y la formación del anillo contráctil, lo que conduce a aneuploidía y micronúcleos, procesos que se aprovechan con frecuencia para estudiar la inestabilidad genómica. Los cambios en la señalización de AURKB se han implicado en fenotipos proliferativos y en la inestabilidad cromosómica asociada a tumores, por lo que constituye un nodo común en la investigación del ciclo celular y la fidelidad mitótica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ARK-2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aurkb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aurkb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aurkb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ARK-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aurkb para la investigación de la señalización de ARK-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aurkb críticos para la función de ARK-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aurkb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ARK-2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ARK-2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aurkb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ARK-2 (m) y el plásmido HDR ARK-2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aurkb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aurkb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.