Particules Lentivirales d'Activation (h) ARID3B: sc-411492-LAC

ARID3B code une protéine de liaison à l’ADN de type ARID (AT-rich interactive domain) qui agit comme régulateur transcriptionnel et influence les décisions de destinée cellulaire, la spécification des lignages et des programmes d’expression génique dépendants de la chromatine. Au sein de réseaux plus larges de contrôle transcriptionnel et épigénétique, ARID3B peut moduler l’activité des promoteurs et des enhancers afin d’orienter les voies de prolifération, de différenciation et de survie. Une expression dérégulée d’ARID3B a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux et fait l’objet d’études pour son impact sur des états transcriptionnels oncogéniques, des phénotypes invasifs et la plasticité des cellules tumorales. Par ailleurs, ARID3B est utilisé comme point d’entrée moléculaire pour explorer les circuits de facteurs de transcription et la dynamique du remodelage de la chromatine dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ARID3B (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ARID3B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ARID3B (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ARID3B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ARID3B. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ARID3B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.