Plasmide CRISPR d'Activation (h) ARID3B: sc-411492-ACT

ARID3B (AT-rich interaction domain 3B) code un facteur de transcription se liant à l’ADN, appartenant à la famille ARID, qui régule des programmes d’expression génique dépendants de la chromatine au cours du développement et de la spécification des lignages. En se fixant à des éléments régulateurs riches en AT et en coopérant avec d’autres régulateurs transcriptionnels, ARID3B influence des processus tels que la détermination du destin cellulaire, le contrôle de la prolifération et des réseaux transcriptionnels associés à la différenciation. Une expression altérée d’ARID3B a été rapportée dans de multiples contextes de cancer ainsi que dans d’autres troubles prolifératifs, où une dérégulation du contrôle transcriptionnel peut affecter des voies liées à la croissance, à la survie et à l’identité cellulaire. Ces caractéristiques font d’ARID3B un nœud utile pour étudier les circuits transcriptionnels, la régulation épigénétique et le remaniement des réseaux de régulation génique dans les cellules humaines.

ARID3B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARID3B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ARID3B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARID3B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARID3B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ARID3B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARID3B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ARID3B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ARID3B dans les cellules tumorales présentant une expression de ARID3B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.