Particules Lentivirales d'Activation (h2) ARID3A: sc-404552-LAC-2

Le gène humain ARID3A code un facteur de transcription se liant à l’ADN, appartenant à la famille des domaines d’interaction avec les régions riches en AT (AT-rich interaction domain), qui régule l’accessibilité de la chromatine et des programmes d’expression génique spécifiques de certains types cellulaires. ARID3A est impliqué dans le développement et l’activation des lymphocytes B, la modulation de la transcription répondant aux interférons et la coordination de réseaux transcriptionnels liés à la différenciation et à la prolifération. Une expression dérégulée d’ARID3A et une activité régulatrice altérée ont été associées à des dysfonctions immunitaires et à des états transcriptionnels liés à la malignité, y compris dans des contextes pertinents pour les cancers hématologiques et des phénotypes auto-immuns. L’édition génétique d’ARID3A permet des études mécanistiques du contrôle des interactions enhancer–promoteur, de l’engagement de lignée et des sorties de signalisation induites par les cytokines, en soutenant des criblages de génomique fonctionnelle et la cartographie des voies de signalisation dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales ARID3A (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ARID3A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ARID3A (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ARID3A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ARID3A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ARID3A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.