ARID3A CRISPR Activation Plasmid (h2): sc-404552-ACT-2

Das humane Gen ARID3A kodiert einen DNA-bindenden Transkriptionsfaktor mit AT-reichem Interaktionsdomän (ARID), der die Chromatinzugänglichkeit und Genexpressionsprogramme reguliert, die an der Festlegung von Zelllinien beteiligt sind, insbesondere während der B-Zellentwicklung und der Regulation von Immunglobulin-Genen. ARID3A ist Teil transkriptioneller Kontrollnetzwerke, die Zellzyklusprogression, Differenzierung und epigenetisches Remodeling über Interaktionen mit Promotor-/Enhancer-Elementen und koregulatorischen Komplexen steuern. Eine fehlregulierte ARID3A-Expression oder -Aktivität wurde mit aberranter hämatopoetischer Differenzierung und Immunsignalgebung in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext onkogener Transkriptionsprogramme sowie autoimmunitätsassoziierter Gensignaturen untersucht. Das Gene Editing von ARID3A in humanen Zellen ermöglicht die mechanistische Aufklärung von Abhängigkeiten der Transkriptionsfaktorbindung, der Enhancer-Funktion und der Umverdrahtung nachgeschalteter Signalwege mithilfe von Verfahren wie RNA-seq, ATAC-seq, ChIP-seq und funktionellen Differenzierungsmodellen.

ARID3A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ARID3A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ARID3A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ARID3A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ARID3A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ARID3A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ARID3A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ARID3A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ARID3A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ARID3A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.