Plásmido Doble Nickase (h) ARID1A: sc-400469-NIC

ARID1A (dominio de interacción rico en AT 1A) codifica una subunidad central del complejo de remodelación de la cromatina dependiente de ATP SWI/SNF (BAF), que modula el posicionamiento de los nucleosomas para regular programas de transcripción. Mediante el control de la accesibilidad de la cromatina, ARID1A influye en la actividad de los potenciadores (enhancers), la expresión génica que especifica linajes, las respuestas al daño del ADN y procesos asociados a la replicación que determinan la progresión del ciclo celular y la estabilidad del genoma. La función de ARID1A se interseca con vías que gobiernan la regulación epigenética y la transcripción sensible al estrés, incluido el diálogo cruzado con la señalización PI3K/AKT y redes asociadas a p53. Las alteraciones en ARID1A se observan con frecuencia en distintos tipos de cáncer humano y se estudian ampliamente por su impacto en el estado de la cromatina, la desregulación transcripcional y la biología de los supresores tumorales.

ARID1A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARID1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARID1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARID1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARID1A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.