Plasmide Double Nickase (h) ARID1A: sc-400469-NIC

ARID1A (AT-rich interaction domain 1A) code une sous-unité centrale du complexe de remodelage de la chromatine SWI/SNF (BAF) dépendant de l’ATP, qui module le positionnement des nucléosomes afin de réguler les programmes transcriptionnels. En contrôlant l’accessibilité de la chromatine, ARID1A influence l’activité des enhancers, l’expression de gènes déterminant la lignée cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les processus associés à la réplication qui façonnent la progression du cycle cellulaire et la stabilité du génome. La fonction d’ARID1A recoupe des voies impliquées dans la régulation épigénétique et la transcription en réponse au stress, notamment via des interactions avec la signalisation PI3K/AKT et des réseaux associés à p53. Des altérations d’ARID1A sont fréquemment observées dans les cancers humains et sont largement étudiées pour leur impact sur l’état de la chromatine, la dérégulation transcriptionnelle et la biologie des suppresseurs de tumeurs.

ARID1A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARID1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARID1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARID1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARID1A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.