Plásmido Doble Nickase (h) ARH3: sc-407965-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ARH3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ARH3 (h) y el plásmido de doble nickasa ARH3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ADPRHL2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ARH3 Anticuerpo (A-7): sc-374162
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ARH3 | sc-407965-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ARH3 | sc-407965-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **ADPRHL2** codifica **ARH3**, una ADP-ribosilhidrolasa que elimina mono- y poli(ADP-ribosa) unidas a serina de las proteínas para revertir la ADP-ribosilación dependiente de PARP. Mediante esta actividad, ARH3 ayuda a regular la señalización y la reparación del daño en el ADN, la dinámica de la cromatina y las vías de respuesta al estrés que dependen de modificaciones reversibles de ADP-ribosa. ARH3 actúa de forma coordinada con PARP1/2 y otras enzimas relacionadas con la ADP-ribosilación para mantener la homeostasis del proteoma tras estrés genotóxico y oxidativo. La alteración de la función de ADPRHL2 se ha vinculado con la neurodegeneración y con una mayor vulnerabilidad celular inducida por el estrés, lo que la convierte en una diana relevante para estudiar la estabilidad del genoma y los mecanismos de resiliencia neuronal.
ARH3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADPRHL2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADPRHL2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADPRHL2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADPRHL2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.