ARH2 Double Nickase Plasmid (m): sc-433335-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ARH2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ARH2 Double-Nickase-Plasmid (m) und ARH2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Adprhl1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ARH2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-433335-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARH2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-433335-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Adprhl1** kodiert **ARH2**, ein ADP-Ribosylhydrolase-ähnliches Protein, das mit dem Abbau oder der Erkennung von ADP-Ribosylierungs-Signalen in Verbindung gebracht wird, die den zellulären Stoffwechsel mit Stressantworten koppeln. ADP-Ribosylierung greift in die DNA-Schadenssignalgebung, die Chromatinregulation und die Kontrolle der Transkription ein und verknüpft damit ARH2-assoziierte Prozesse mit Genomstabilität und zellulärer Homöostase. In experimentellen Systemen ist eine Störung der ADP-Ribose-Signalgebung häufig mit veränderter Zellüberlebensfähigkeit, inflammatorischer Signalgebung sowie einer Umgestaltung zytoskelettaler oder mitochondrialer Funktionen assoziiert, was **Adprhl1** zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen macht. Diese Zusammenhänge liefern einen krankheitsrelevanten Kontext für die Untersuchung, wie ADP-Ribose-abhängige Regulation zu kardiometabolischen und neurobiologischen Phänotypen beiträgt, ohne damit klinische Ergebnisse zu implizieren.
ARH2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Adprhl1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Adprhl1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Adprhl1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Adprhl1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.