Plasmide Double Nickase (h2) ARFGAP1: sc-403939-NIC-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h2) ARFGAP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ARFGAP1 Double Nickase (h2) et le plasmide ARFGAP1 Double Nickase (h22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARFGAP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ARFGAP1 Antibody (C-4): sc-271303
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h2) ARFGAP1 | sc-403939-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain ARFGAP1 code la protéine activatrice de la GTPase ARF (ADP-ribosylation factor) 1, un régulateur associé à l’appareil de Golgi qui accélère l’hydrolyse du GTP par les petites GTPases de la famille ARF afin de coordonner le bourgeonnement des vésicules et la dynamique des manteaux protéiques. En modulant le trafic rétrograde dépendant de COPI et le transport endosome–Golgi, ARFGAP1 contribue à la courbure membranaire, au tri des cargos et au maintien de l’architecture du Golgi, reliant la signalisation des ARF à des voies plus larges de sécrétion et de recyclage. La dérégulation du trafic médié par ARFGAP1 a été étudiée dans des contextes où la protéostasie et le transport des organites sont perturbés, notamment dans des mécanismes liés à la neurodégénérescence impliquant le transport vésiculaire et la gestion des protéines. L’édition génétique d’ARFGAP1 permet des études mécanistiques du contrôle de la voie ARF, de la biogenèse des vésicules et de la fonction du Golgi au moyen de modèles knock-out/knock-in, de la cartographie des interactions et d’essais de trafic dans des systèmes cellulaires humains.
ARFGAP1 Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARFGAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARFGAP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARFGAP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARFGAP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.