ARF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419189

Übersicht

Arf4 kodiert den ADP-Ribosylierungsfaktor 4 (ARF4), eine kleine GTPase der ARF-Familie, die den Membrantransport und den Lipidumbau im Golgi- und Endosomensystem reguliert. ARF4 wechselt zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen, um Vesikelknospung, Frachtsortierung und Rezeptortransport zu koordinieren, einschließlich Signalwegen, die den sekretorischen Verkehr und die Zielsteuerung zu Zilien betreffen. Durch Interaktionen mit Coat-/Adapter-Maschinerien und dem Phosphoinositidstoffwechsel trägt ARF4 dazu bei, die Organisation von Organellen und die polarisierte Membranlieferung aufrechtzuerhalten. Eine Fehlregulation des ARF4-abhängigen Transports wurde mit veränderter Rezeptorsignalgebung, Defekten der Ziliogenese und zellulären Stressantworten in Zusammenhang gebracht, die für Neurobiologie, epitheliale Homöostase und tumorassoziierte Phänotypen relevant sind.

Das ARF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Arf4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Arf4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Arf4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ARF4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Arf4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ARF4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Arf4-Exone abzielen, die für die ARF4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Arf4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ARF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ARF4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Arf4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ARF4 HDR-Plasmid (m) und ARF4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Arf4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Arf4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.