Plasmide Double Nickase (h) ARF3: sc-402706-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ARF3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ARF3 Double Nickase (h) et le plasmide ARF3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARF3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ARF3 Antibody (41): sc-135841
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ARF3 | sc-402706-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ARF3 | sc-402706-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le facteur 3 d’ADP-ribosylation (ARF3) est une petite GTPase de la famille ARF qui régule le trafic vésiculaire en contrôlant le recrutement des protéines de manteau, la courbure membranaire et le métabolisme des phospholipides au niveau du Golgi et du système endosomal. L’alternance entre les états liés au GDP et au GTP relie ARF3 au transport sécrétoire et endocytaire, notamment au trafic rétrograde médié par COPI et à la coordination du tri des cargos. Par ses rôles dans la dynamique membranaire et la signalisation sur les membranes intracellulaires, ARF3 influence des processus tels que le recyclage des récepteurs, la sécrétion de protéines et l’organisation du cytosquelette. Une dérégulation de la signalisation de la famille ARF et des voies de trafic a été associée à des modifications de la migration cellulaire, de la prolifération et des réponses au stress, ce qui fait d’ARF3 une cible utile pour des études mécanistiques de phénotypes liés au trafic dans des modèles pertinents pour les maladies.
ARF3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARF3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARF3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARF3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARF3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.