Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) ARF1: sc-401608-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ARF1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ARF1 (h) y el plásmido de doble nickasa ARF1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ARF1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ARF1 Anticuerpo (ARFS 1A9/5): sc-53168
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ARF1 | sc-401608-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ARF1 | sc-401608-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El factor de ADP-ribosilación 1 (ARF1) es una pequeña GTPasa que alterna entre los estados unidos a GDP y a GTP para regular el tráfico de membranas y la dinámica de los orgánulos, en particular en el aparato de Golgi y el sistema endosomal. El ARF1 activo recluta proteínas de recubrimiento y adaptadores para impulsar la gemación de vesículas, coordina el metabolismo de los fosfoinosítidos y favorece la remodelación del citoesqueleto mediante efectores aguas abajo. A través de estas funciones, ARF1 contribuye al flujo de la vía secretora, al reciclaje de receptores y a la transducción de señales vinculada al crecimiento y la migración celular. La desregulación del tráfico dependiente de ARF1 se ha asociado con proliferación alterada y fenotipos invasivos en modelos de cáncer, así como con alteraciones de la función neuronal y de las células inmunitarias en contextos relevantes para enfermedades.
ARF1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARF1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.