Plásmido Doble Nickase (h) Arc: sc-400231-NIC

ARC codifica la proteína asociada al citoesqueleto regulada por la actividad (Arc), producto de un gen de respuesta inmediata que acopla la actividad neuronal al remodelado sináptico. Arc regula la endocitosis de receptores AMPA, la dinámica del citoesqueleto de actina y el tráfico de componentes postsinápticos, configurando así la potenciación/depresión a largo plazo y el escalado sináptico homeostático. Mediante interacciones con la maquinaria endocítica y del citoesqueleto, Arc integra la señalización aguas abajo de la neurotransmisión glutamatérgica y de las vías dependientes de calcio para modular la plasticidad dependiente de la experiencia. La alteración de la expresión o la función de ARC se ha vinculado a mecanismos implicados en la investigación neuropsiquiátrica y neurodegenerativa, incluidos la conectividad sináptica desregulada y procesos asociados a la memoria.

Arc El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.