Plásmido Doble Nickase (h) Aquaporin 8/AQP8: sc-402490-NIC

AQP8 codifica la acuaporina 8, un canal integral de membrana que facilita el transporte transmembrana de agua y que también puede conducir pequeños solutos neutros, como el peróxido de hidrógeno, dependiendo del contexto celular. AQP8 contribuye a la homeostasis osmótica, al manejo de fluidos en epitelios y a la señalización redox intracelular, vinculando la permeabilidad de la membrana con procesos que incluyen la función mitocondrial, la regulación metabólica y la señalización inflamatoria. La expresión o localización alteradas de AQP8 se han asociado con disfunción de la barrera epitelial y con respuestas desreguladas al estrés oxidativo, características observadas en múltiples contextos fisiopatológicos. En tejidos humanos, AQP8 se estudia con frecuencia en relación con la fisiología hepatobiliar, el transporte epitelial gastrointestinal y la modulación del estallido oxidativo de células inmunitarias.

Aquaporin 8/AQP8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AQP8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AQP8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AQP8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AQP8 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.