Aquaporin 8/AQP8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419179

Descripción general

Aqp8 codifica la acuaporina 8 (AQP8), un canal de membrana que facilita el movimiento rápido de agua y que también puede contribuir, en ciertos tipos celulares, al transporte transmembrana de pequeños solutos neutros como el peróxido de hidrógeno. En tejidos de ratón, la expresión de AQP8 se asocia con el manejo de fluidos epiteliales y la fisiología secretora, y se ha descrito su localización subcelular tanto en la membrana plasmática como en membranas intracelulares, lo que respalda funciones en el equilibrio osmótico y la homeostasis de orgánulos. Al influir en la permeabilidad al agua y en el flujo de solutos vinculados al estado redox, AQP8 se relaciona con procesos como la función de barrera epitelial, la fisiología mitocondrial y la señalización del estrés oxidativo. La actividad o expresión desregulada de AQP8 se ha investigado en el contexto de fenotipos inflamatorios y metabólicos, la fisiología hepática y gastrointestinal, y alteraciones más amplias de la homeostasis redox celular relevantes para mecanismos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 8/AQP8 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aqp8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aqp8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aqp8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Aquaporin 8/AQP8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aqp8 para la investigación de la señalización de Aquaporin 8/AQP8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aqp8 críticos para la función de Aquaporin 8/AQP8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aqp8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Aquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Aquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aqp8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Aquaporin 8/AQP8 (m) y el plásmido HDR Aquaporin 8/AQP8 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aqp8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aqp8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.