Plásmido CRISPR de Activación (h) Aquaporin 8/AQP8: sc-402490-ACT

AQP8 codifica la acuaporina 8, un canal de membrana que facilita el transporte rápido de agua y que también permite el paso de pequeños solutos como el peróxido de hidrógeno, vinculando la permeabilidad de la membrana con el equilibrio osmótico y la señalización redox. AQP8 se expresa en contextos epiteliales y relevantes para el sistema inmunitario, donde contribuye al movimiento de fluidos, la homeostasis de orgánulos y el flujo regulado de especies reactivas de oxígeno, lo que puede influir en vías que controlan la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. Se ha informado de una expresión alterada de AQP8 en estados inflamatorios y en múltiples tipos de cáncer, donde el transporte desregulado de agua y H2O2 puede modificar la migración celular, la función de barrera y la dinámica de la señalización. En consecuencia, AQP8 se estudia con frecuencia en modelos de fisiología epitelial, biología del estrés oxidativo y comportamiento de células tumorales.

Aquaporin 8/AQP8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AQP8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Aquaporin 8/AQP8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AQP8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AQP8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Aquaporin 8/AQP8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AQP8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Aquaporin 8/AQP8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Aquaporin 8/AQP8 en células tumorales con expresión de AQP8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.