Plasmide Double Nickase (h) Aquaporin 5/AQP5: sc-400567-NIC

AQP5 code l’aquaporine 5, un canal membranaire à eau qui facilite un transport rapide de l’eau, entraîné par un gradient osmotique, à travers les membranes des cellules épithéliales et glandulaires. Chez l’humain, AQP5 contribue à la sécrétion de liquides et au contrôle de l’hydratation dans les glandes salivaires et lacrymales, ainsi que dans les épithéliums des voies aériennes et alvéolaires, en influençant la physiologie de la barrière épithéliale et l’homéostasie du film liquidien de surface des muqueuses. Sa régulation recoupe des processus de signalisation qui modulent le trafic membranaire et l’équilibre osmotique, notamment des voies associées au calcium et à l’AMPc qui affectent la localisation du canal et la dynamique du transport épithélial. Des modifications de l’expression ou de la localisation d’AQP5 ont été associées dans la littérature à une dysrégulation de la fonction sécrétoire et à un déséquilibre hydrique épithélial, pertinents pour des affections inflammatoires des voies aériennes, des dysfonctionnements glandulaires et des changements liés aux tumeurs touchant la migration cellulaire et l’hydratation tissulaire.

Aquaporin 5/AQP5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AQP5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AQP5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AQP5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AQP5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.