Plásmido Doble Nickase (h) Aquaporin 5/AQP5: sc-400567-NIC

AQP5 codifica la acuaporina 5, un canal de agua de membrana que facilita un transporte rápido de agua impulsado por gradientes osmóticos a través de las membranas de células epiteliales y glandulares. En humanos, AQP5 contribuye a la secreción de fluidos y al control de la hidratación en las glándulas salivales y lagrimales, así como en los epitelios de las vías respiratorias y los alvéolos, influyendo en la fisiología de la barrera epitelial y en la homeostasis del líquido de la superficie mucosa. Su regulación se intersecta con procesos de señalización que modulan el tráfico de membrana y el equilibrio osmótico, incluidas vías asociadas al calcio y al AMPc que afectan la localización del canal y la dinámica del transporte epitelial. En la literatura, la expresión o localización alteradas de AQP5 se han vinculado con una función secretora desregulada y con desequilibrios de fluidos epiteliales relevantes para afecciones inflamatorias de las vías respiratorias, disfunción glandular y cambios asociados a tumores en la migración celular y la hidratación tisular.

Aquaporin 5/AQP5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AQP5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AQP5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AQP5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AQP5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.