Plasmide CRISPR d'Activation (h) Aquaporin 5/AQP5: sc-400567-ACT

AQP5 code l’aquaporine 5, un canal membranaire à eau qui facilite un transport rapide de l’eau, entraîné par les gradients osmotiques, à travers la membrane plasmique des épithéliums sécrétoires. Elle contribue à l’homéostasie hydrique et à la sécrétion dans des tissus tels que les glandes salivaires et lacrymales ainsi que les voies aériennes, participant à la fonction de barrière épithéliale et à la régulation de l’hydratation des muqueuses. La localisation et l’abondance d’AQP5 sont régulées de façon dynamique par des voies de signalisation qui contrôlent le trafic membranaire et la disponibilité du canal dépendante de la phosphorylation, la reliant ainsi aux mouvements d’ions et d’eau au cours de la sécrétion glandulaire. Une expression dérégulée d’AQP5 a été associée à des modifications de l’équilibre du liquide de surface des voies aériennes, à un remodelage épithélial inflammatoire et à un dysfonctionnement glandulaire, ce qui motive des études mécanistiques en biologie respiratoire et exocrine.

Aquaporin 5/AQP5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AQP5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Aquaporin 5/AQP5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AQP5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AQP5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Aquaporin 5/AQP5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AQP5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Aquaporin 5/AQP5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Aquaporin 5/AQP5 dans les cellules tumorales présentant une expression de AQP5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.