Plásmido CRISPR de Activación (h) Aquaporin 5/AQP5: sc-400567-ACT

AQP5 codifica la acuaporina 5, un canal de agua de membrana que facilita el transporte rápido de agua, impulsado por gradientes osmóticos, a través de la membrana plasmática en epitelios secretores. Contribuye a la homeostasis de los fluidos y a la secreción en tejidos como las glándulas salivales y lagrimales y las vías respiratorias, aportando a la función de barrera epitelial y a la regulación de la hidratación mucosa. La localización y la abundancia de AQP5 se regulan dinámicamente mediante vías de señalización que controlan el tráfico de membrana y la disponibilidad del canal dependiente de fosforilación, vinculándola al movimiento de iones y agua durante la secreción glandular. La expresión desregulada de AQP5 se ha asociado con alteraciones del equilibrio del líquido superficial de las vías respiratorias, remodelado epitelial inflamatorio y disfunción glandular, lo que impulsa estudios mecanísticos en biología respiratoria y exocrina.

Aquaporin 5/AQP5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AQP5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Aquaporin 5/AQP5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AQP5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AQP5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Aquaporin 5/AQP5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AQP5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Aquaporin 5/AQP5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Aquaporin 5/AQP5 en células tumorales con expresión de AQP5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.