Plásmido Doble Nickase (h) Aquaporin 2/AQP2: sc-400402-NIC

AQP2 codifica la acuaporina‑2, un canal de agua regulado por la vasopresina que media la reabsorción transcelular de agua en las células principales del conducto colector renal. Su tráfico hacia la membrana apical está controlado por la señalización cAMP/PKA impulsada por AVPR2 y por la inserción y recuperación dependientes de fosforilación desde y hacia vesículas, lo que vincula a AQP2 con la polaridad epitelial y la homeostasis osmótica. Las alteraciones en la expresión, la localización o la función del canal AQP2 se asocian con una capacidad reducida para concentrar la orina y contribuyen a trastornos del balance hídrico como la diabetes insípida nefrogénica y estados hiponatrémicos. Como proteína de membrana enriquecida en el riñón, AQP2 también se utiliza para estudiar el reciclaje endosomal, el control de calidad de proteínas de membrana y las vías de transporte reguladas por hormonas.

Aquaporin 2/AQP2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AQP2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AQP2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AQP2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AQP2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.