Plásmido Doble Nickase (h) Aquaporin 1/AQP1: sc-400340-NIC

AQP1 (acuaporina 1) es un canal de membrana tetramérico que facilita el transporte rápido y selectivo de agua a través de la membrana plasmática y contribuye al mantenimiento del equilibrio osmótico y del volumen celular. En los tejidos humanos se expresa de forma elevada en eritrocitos, en el túbulo proximal renal y la rama delgada descendente, en el plexo coroideo y en el endotelio microvascular, lo que sustenta procesos como el movimiento transepitelial de fluidos y la permeabilidad microvascular. El flujo de agua dependiente de AQP1 se integra con las respuestas al estrés osmótico y a señales mecánicas, modulando la motilidad celular y la homeostasis de los fluidos tisulares. La alteración de la expresión de AQP1 se ha asociado con una regulación anómala del manejo de fluidos y fenotipos relacionados con el edema, y se estudia con frecuencia en contextos que incluyen la fisiología renal, la angiogénesis y la remodelación del microambiente asociado a tumores.

Aquaporin 1/AQP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AQP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AQP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AQP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AQP1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.