Plásmido CRISPR de Activación (m) Aquaporin 1/AQP1: sc-419172-ACT

El gen murino **Aqp1** codifica la **acuaporina 1 (AQP1)**, un canal de agua tetramérico que permite el rápido movimiento osmótico de agua a través de las membranas plasmáticas y contribuye a la homeostasis de líquidos en el endotelio microvascular, los túbulos proximales renales y otros epitelios implicados en el transporte de agua. Al regular el volumen celular, el flujo transcelular de agua y los gradientes osmóticos locales, AQP1 influye en procesos como la permeabilidad capilar, la secreción y reabsorción epiteliales y el comportamiento migratorio en ciertos tipos celulares. El transporte de agua dependiente de Aqp1 se integra con vías que controlan el manejo de iones y la función de barrera, incluida su coordinación con transportadores de solutos y la dinámica de las uniones estrechas. La alteración de la expresión o la localización de AQP1 se ha relacionado con un equilibrio hídrico desregulado y fenotipos asociados a edema, lo que la hace relevante para estudios de fisiología renal, permeabilidad vascular y microambientes de fluidos tisulares.

Aquaporin 1/AQP1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Aqp1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Aquaporin 1/AQP1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Aqp1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Aqp1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Aquaporin 1/AQP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Aqp1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Aquaporin 1/AQP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Aquaporin 1/AQP1 en células tumorales con expresión de Aqp1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.