Plásmido CRISPR de Activación (h) AQP11: sc-403957-ACT

El AQP11 humano codifica la acuaporina-11, un miembro atípico de la familia de las acuaporinas que se localiza predominantemente en membranas intracelulares y contribuye a la homeostasis celular del agua y de pequeños solutos. La actividad de AQP11 se ha relacionado con el mantenimiento de la integridad del retículo endoplásmico, la regulación del equilibrio osmótico y las vías de proteostasis que influyen en las respuestas celulares al estrés y en la función de los orgánulos. En el riñón y en otros tejidos secretores o metabólicamente activos, la alteración de la expresión de AQP11 se ha asociado con la desregulación de la homeostasis de las células tubulares y con una mayor susceptibilidad a fenotipos de lesión relacionados con el estrés. Estas propiedades hacen de AQP11 una diana útil para investigar el transporte de membrana, los procesos asociados al RE y funciones dependientes del contexto en la fisiología celular relevante para enfermedades.

AQP11 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AQP11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AQP11 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AQP11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AQP11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AQP11. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AQP11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AQP11 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AQP11 en células tumorales con expresión de AQP11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.