APRT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419171
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- APRT El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico APRT, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
APRT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419171 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen **Aprt** de ratón codifica la adenina fosforribosiltransferasa (APRT), una enzima citosólica clave de la vía de rescate de purinas que convierte la adenina en AMP utilizando pirofosfato de fosforribosilo (PRPP). Al reciclar bases púricas, APRT contribuye al equilibrio del pool de nucleótidos, a la síntesis de ADN/ARN y al metabolismo energético celular, especialmente en condiciones en las que la síntesis *de novo* de purinas está limitada. La alteración de APRT perturba la homeostasis de purinas y puede favorecer la acumulación de metabolitos derivados de la adenina, lo que vincula la actividad de APRT con las respuestas al estrés metabólico. Por ello, **Aprt** es relevante para estudiar mecanismos que conectan el metabolismo de nucleótidos con el mantenimiento del genoma, el estrés oxidativo y la susceptibilidad específica de tejidos al desequilibrio metabólico.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO APRT (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aprt en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aprt junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aprt tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína APRT.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aprt para la investigación de la señalización de APRT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Aprt críticos para la función de APRT
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aprt para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido APRT CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido APRT CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aprt. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR APRT (m) y el plásmido HDR APRT (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aprt para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aprt definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.