APRT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410689

Descripción general

APRT (adenina fosforribosiltransferasa) es una fosforribosiltransferasa citosólica que cataliza el reciclaje (salvamento) de adenina a monofosfato de adenosina (AMP) utilizando pirofosfato de fosforribosilo, contribuyendo a la homeostasis de nucleótidos y al metabolismo de purinas. Esta actividad conecta la vía de salvamento de purinas con procesos celulares más amplios, como la síntesis de ADN/ARN, el equilibrio energético y las respuestas al estrés de replicación, que dependen de reservas adecuadas de nucleótidos. Las alteraciones en la función de APRT desestabilizan el flujo de purinas y pueden desplazar la dependencia hacia la biosíntesis de purinas de novo, proporcionando un sistema manejable para estudiar la compensación metabólica y el desequilibrio de nucleótidos. La deficiencia de APRT se ha asociado con alteraciones en el manejo de purinas y patología renal relacionada, lo que convierte a APRT en un modelo útil para investigar fenotipos celulares vinculados al metabolismo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO APRT (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen APRT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del APRT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de APRT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína APRT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en APRT para la investigación de la señalización de APRT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de APRT críticos para la función de APRT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de APRT para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido APRT CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido APRT CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus APRT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR APRT (h) y el plásmido HDR APRT (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología APRT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana APRT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.