Plasmide Double Nickase (m) APP/Amyloid Precursor Protein: sc-419170-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) APP/Amyloid Precursor Protein correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide APP/Amyloid Precursor Protein Double Nickase (m) et le plasmide APP/Amyloid Precursor Protein Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant App. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: β-Amyloid Antibody (B-4): sc-28365
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) APP/Amyloid Precursor Protein | sc-419170-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) APP/Amyloid Precursor Protein | sc-419170-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’app murine (App) code la protéine précurseur de l’amyloïde (APP), une glycoprotéine transmembranaire de type I acheminée via les voies sécrétoire et endocytaire, où elle soutient la croissance des neurites, la formation des synapses et la signalisation intracellulaire. APP est maturée par protéolyse par les α-, β- et γ-sécrétases, ce qui l’associe à la protéolyse intramembranaire régulée et à la génération de fragments bioactifs qui influencent l’homéostasie neuronale. Son processing interagit avec le trafic membranaire, l’organisation des radeaux lipidiques et des voies de signalisation dépendantes du calcium, et elle est largement étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence. Un clivage d’APP dérégulé et une production altérée de fragments sont au cœur des travaux mécanistiques sur la biologie de l’amyloïde, la neuroinflammation et la dysfonction synaptique dans les modèles de maladie d’Alzheimer.
APP/Amyloid Precursor Protein Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus App dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de App. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de App. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de App.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.