apolipoprotein E/apoE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419167

Descripción general

El gen Apoe del ratón codifica la apolipoproteína E (apoE), una proteína secretada y asociada a lipoproteínas que regula el transporte de colesterol y triglicéridos en el plasma y en el sistema nervioso central. La apoE media la captación dependiente de receptores y la redistribución de lípidos mediante interacciones con miembros de la familia del receptor de LDL, lo que determina el aclaramiento de partículas lipoproteicas, la homeostasis de membrana y las vías celulares de eflujo de colesterol. En el cerebro, la apoE participa en el tráfico lipídico glial, el mantenimiento sináptico y la señalización neuroinflamatoria, vinculando el metabolismo de los lípidos con la resiliencia neuronal. La alteración de la función de Apoe se utiliza ampliamente para modelar mecanismos de dislipidemia y aterosclerosis, y también es fundamental en estudios experimentales de depósito de amiloide, respuestas microgliales y procesos neurodegenerativos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO apolipoprotein E/apoE (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Apoe en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Apoe junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Apoe tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína apolipoprotein E/apoE.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Apoe para la investigación de la señalización de apolipoprotein E/apoE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Apoe críticos para la función de apolipoprotein E/apoE
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Apoe para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido apolipoprotein E/apoE CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido apolipoprotein E/apoE CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Apoe. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR apolipoprotein E/apoE (m) y el plásmido HDR apolipoprotein E/apoE (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Apoe para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Apoe definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.