Plásmido CRISPR de Activación (h) apoL1: sc-403137-ACT

APOL1 codifica la apolipoproteína L1 (apoL1), una proteína de unión a lípidos implicada en la defensa inmunitaria innata y en las respuestas al estrés celular. La apoL1 se asocia con membranas endosómicas y autofágicas, y se ha vinculado con la regulación del tráfico vesicular, las vías de muerte celular programada y las redes de señalización inducibles por interferón. En tipos celulares relevantes para el riñón, la expresión de APOL1 y la actividad dependiente de variantes se han estudiado en el contexto de la homeostasis de los podocitos, la disfunción mitocondrial y la señalización inflamatoria. La biología desregulada de APOL1 se investiga ampliamente por su contribución a los mecanismos subyacentes a fenotipos renales proteinúricos y a modelos de lesión mediada por el sistema inmunitario.

apoL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de APOL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

apoL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus APOL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional APOL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de apoL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo APOL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de apoL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía apoL1 en células tumorales con expresión de APOL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.