ApoER2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403253-ACT

LRP8 kodiert den Apolipoprotein‑E‑Rezeptor 2 (ApoER2), ein Mitglied der LDL‑Rezeptorfamilie, das Endozytose und Signaltransduktion in Neuronen und Gefäßzellen vermittelt. ApoER2 fungiert als Rezeptor für Reelin und ApoE‑haltige Lipoproteine und unterstützt neuronale Migration, synaptische Plastizität sowie zytoskelettales Remodeling über nachgeschaltete Dab1‑abhängige Signalwege und Crosstalk mit PI3K/AKT‑ und Src‑Familien‑Kinase‑Signalwegen. Im zentralen Nervensystem beeinflusst LRP8 den Transport glutamaterger Rezeptoren und die Langzeitpotenzierung und verknüpft seine Regulation damit mit Mechanismen des Lernens und der Gedächtnisbildung. Eine fehlregulierte ApoER2‑Signalgebung und ein Ungleichgewicht der Isoformen wurden mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht; zudem wird LRP8 im Kontext der Lipidverarbeitung und der Thrombozytenbiologie untersucht, die für vaskuläre Pathologien relevant sind.

ApoER2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LRP8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ApoER2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LRP8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LRP8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ApoER2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LRP8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ApoER2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ApoER2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LRP8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.