Plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-II (m): sc-419164

Présentation

Le gène murin Apoc2 code l’apolipoprotéine C-II (apoC-II), une apolipoprotéine sécrétée qui agit comme cofacteur essentiel de la lipoprotéine lipase, en favorisant l’hydrolyse des triglycérides dans les chylomicrons et les VLDL et en permettant la captation, par les tissus périphériques, des acides gras libérés. Par ce rôle, l’apoC-II est au cœur de la clairance des triglycérides plasmatiques et du transport des lipides, reliant l’absorption intestinale des lipides et la production hépatique de lipoprotéines au métabolisme énergétique. Une altération de la fonction d’APOC2 est associée à des phénotypes d’hypertriglycéridémie sévère et de dyslipoprotéinémie, offrant un point d’entrée mécanistique pour étudier l’homéostasie lipidique et les réponses en aval au stress métabolique. Les modèles centrés sur Apoc2 sont donc utiles pour explorer les voies reliant la lipolyse, le flux d’acides gras et le remodelage des lipoprotéines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-II (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Apoc2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Apoc2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Apoc2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine apoC-II.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Apoc2 pour l'étude de la signalisation de apoC-II, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Apoc2 essentiels à la fonction de apoC-II
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Apoc2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le apoC-II plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le apoC-II plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Apoc2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le apoC-II plasmide HDR (m) et le apoC-II (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Apoc2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Apoc2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.