Plásmido Doble Nickase (h) APOBEC3F: sc-406610-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)APOBEC3F consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa APOBEC3F (h) y el plásmido de doble nickasa APOBEC3F (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a APOBEC3F. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) APOBEC3F | sc-406610-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) APOBEC3F | sc-406610-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El APOBEC3F humano codifica una desaminasa de citidina dependiente de zinc que edita ADN monocatenario convirtiendo citidina en uridina, introduciendo así mutaciones que restringen la replicación de retrovirus y retroelementos endógenos. Como parte de la familia APOBEC3, APOBEC3F participa en vías de inmunidad intrínseca que se intersectan con intermediarios de la replicación viral, la señalización de daño en el ADN y la vigilancia del genoma. Su actividad se modula mediante interacciones con antagonistas virales como Vif del VIH-1, lo que vincula la biología de APOBEC3F con las carreras armamentistas huésped–patógeno y los mecanismos de escape viral. La desaminación desregulada o dirigida a dianas incorrectas por enzimas APOBEC también se asocia con procesos mutacionales que pueden contribuir a la inestabilidad genómica, haciendo de APOBEC3F un factor relevante para estudios de firmas mutacionales y microambientes inflamatorios.
APOBEC3F El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus APOBEC3F en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de APOBEC3F. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de APOBEC3F. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con APOBEC3F alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.