Plásmido CRISPR de Activación (h) APOBEC3B: sc-401700-ACT

APOBEC3B codifica una desaminasa de citidina que edita ADN monocatenario al convertir citosina en uracilo, y participa en la defensa antiviral intrínseca y en la restricción de retroelementos. Su actividad se integra con los procesos de replicación y reparación del ADN, incluidas las respuestas al estrés replicativo y el procesamiento mutagénico de lesiones, moldeando así los patrones de mutación a escala genómica. La expresión desregulada de APOBEC3B se asocia con una mayor carga mutacional somática y con firmas mutacionales características de APOBEC en múltiples tipos de tumor. Como resultado, APOBEC3B se estudia ampliamente en vías que controlan la estabilidad del genoma, la señalización inmunitaria innata y la adaptación impulsada por mutaciones.

APOBEC3B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de APOBEC3B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

APOBEC3B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus APOBEC3B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional APOBEC3B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de APOBEC3B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo APOBEC3B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de APOBEC3B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía APOBEC3B en células tumorales con expresión de APOBEC3B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.