Plásmido CRISPR de Activación (h) apoA-IV: sc-402217-ACT

El gen humano **APOA4** codifica la apolipoproteína A-IV (apoA-IV), una apolipoproteína secretada que se sintetiza principalmente en los enterocitos intestinales y que, en la circulación, se asocia con los quilomicrones y las HDL. La apoA-IV contribuye a la absorción de lípidos y al metabolismo posprandial de las lipoproteínas, favoreciendo el eflujo de colesterol y modulando enzimas implicadas en la remodelación de lipoproteínas dentro de las vías de transporte reverso de colesterol. Por sus funciones en el manejo intestinal de lípidos y en la homeostasis lipídica sistémica, **APOA4** se estudia en el contexto de la dislipidemia, la biología relacionada con la aterosclerosis y los mecanismos de enfermedades metabólicas. La dinámica de su expresión también la convierte en un marcador útil de programas transcripcionales sensibles a nutrientes en modelos gastrointestinales y hepáticos.

apoA-IV El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de APOA4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

apoA-IV El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus APOA4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional APOA4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de apoA-IV. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo APOA4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de apoA-IV en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía apoA-IV en células tumorales con expresión de APOA4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.