Plásmido CRISPR de Activación (h) APLNR: sc-402374-ACT

APLNR codifica el receptor de apelina (también conocido como APJ), un receptor acoplado a proteína G de clase A activado por los ligandos peptídicos apelina y ELA/Toddler. La señalización de APLNR regula el desarrollo vascular y la función endotelial, con activación aguas abajo de vías como PI3K–AKT, ERK/MAPK, la movilización de calcio y la producción de óxido nítrico, que configuran programas angiogénicos, metabólicos y contráctiles. Además de sus funciones en la homeostasis cardiovascular y de líquidos, la actividad de APLNR se ha relacionado con la modulación de la migración celular y la señalización inflamatoria en múltiples contextos tisulares. La desregulación de la señalización del eje APLNR–apelina se asocia con fenotipos cardiometabólicos y se ha investigado en la remodelación vascular y en la biología del microambiente tumoral, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos.

APLNR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de APLNR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

APLNR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus APLNR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional APLNR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de APLNR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo APLNR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de APLNR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía APLNR en células tumorales con expresión de APLNR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.