Apg-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403942-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Apg-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Apg-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Apg-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSPA4L abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Apg-1: sc-133253
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Apg-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403942-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Apg-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403942-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA4L codiert Apg-1, ein Mitglied der HSP70-Familie, das als ATP-abhängiger molekularer Chaperon wirkt und die Proteostase unter basalen Bedingungen sowie unter Stress unterstützt. Apg-1 ist an der Proteinfaltung, der Verhinderung von Aggregation und der Qualitätskontrolle in Zusammenarbeit mit Co‑Chaperonen beteiligt und ist damit mit zellulären Stressantworten und der Aufrechterhaltung der Protein-Homöostase verknüpft. Über Funktionen im Umgang mit ungefalteten Proteinen und proteotoxischem Stress ist HSPA4L für Signalwege relevant, die an Zellüberleben, Differenzierung und Anpassung an schädliche Umwelteinflüsse beteiligt sind. Eine Fehlregulation von Chaperon-Netzwerken, zu denen Apg-1 gehört, wurde mit veränderter Stresstoleranz und Proteinfehlfaltungs-Phänotypen in Verbindung gebracht, die in der Krebsbiologie, in Modellen der Neurodegeneration sowie in reproduktiven und entwicklungsbiologischen Kontexten untersucht werden.
Apg-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSPA4L-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSPA4L abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSPA4L-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSPA4L-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.