Partículas Lentivirales de Activación (h) Ape2: sc-407307-LAC

La APEX2 humana (Ape2) codifica una nucleasa de reparación del ADN implicada en el mantenimiento de la estabilidad del genoma durante la replicación del ADN y en respuesta al daño oxidativo y por alquilación. Ape2 participa en la reparación por escisión de bases y en el procesamiento de sitios abásicos, coordinándose con las vías de replicación y de puntos de control para limitar el estrés replicativo y la acumulación de roturas de cadena de ADN. La actividad alterada de APEX2 se ha asociado con defectos en la señalización del daño, un aumento de la carga mutacional y una hipersensibilidad celular a agentes genotóxicos, lo que la vincula con la biología del cáncer y con mecanismos más amplios de mantenimiento del genoma. Como diana de investigación, APEX2 permite estudios mecanísticos sobre la elección de vías de reparación del ADN, la integridad de la horquilla de replicación y las redes de señalización inducidas por el estrés.

Las partículas de activación lentiviral Ape2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de APEX2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Ape2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción APEX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Ape2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo APEX2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.