Ape2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-407307-LAC

Humanes APEX2 (Ape2) kodiert eine an der DNA-Reparatur beteiligte Nuklease, die mit der Aufrechterhaltung der Genomstabilität während der DNA-Replikation sowie als Antwort auf oxidative und alkylierende Schäden in Verbindung steht. Ape2 ist an der Basenexzisionsreparatur und der Verarbeitung abasischer Stellen beteiligt und koordiniert dabei mit Replikations- und Checkpoint-Signalwegen, um Replikationsstress und die Anhäufung von DNA-Strangbrüchen zu begrenzen. Eine veränderte APEX2-Aktivität wurde mit Defekten in der Schadenssignalgebung, einer erhöhten Mutationslast und einer zellulären Überempfindlichkeit gegenüber genotoxischen Stressoren assoziiert, was eine Verbindung zur Krebsbiologie und zu übergeordneten Mechanismen der Genomerhaltung herstellt. Als Forschungsziel ermöglicht APEX2 mechanistische Studien zur Auswahl von DNA-Reparaturwegen, zur Integrität von Replikationsgabeln und zu stressinduzierten Signalnetzwerken.

Ape2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente APEX2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Ape2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der APEX2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Ape2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen APEX2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.