Plasmide CRISPR/Cas9 KO APC8 (h): sc-406761

Présentation

CDC23 code APC8, une sous-unité centrale du complexe promoteur de l’anaphase/cyclosome (APC/C), une ligase E3 de l’ubiquitine qui orchestre la progression mitotique et la sortie du cycle cellulaire en ciblant des régulateurs clés tels que la sécurine et les cyclines pour leur dégradation par le protéasome. APC8 contribue à l’assemblage de l’APC/C et à la reconnaissance des substrats, en intégrant les signaux des points de contrôle afin d’assurer une séparation correcte des chromatides sœurs et le maintien de la stabilité du génome. Par son rôle dans la protéolyse médiée par l’ubiquitine, CDC23 est relié à des voies qui gouvernent le contrôle du point de contrôle du fuseau, la synchronisation de la mitose et des transitions ordonnées entre G2/M et l’anaphase. La dérégulation des composants de l’APC/C et des mécanismes associés de contrôle du cycle cellulaire est fréquemment impliquée dans des troubles prolifératifs et des phénotypes liés à l’aneuploïdie, faisant de CDC23/APC8 une cible pertinente pour des études mécanistiques des défauts de division cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO APC8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDC23 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDC23, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDC23 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine APC8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDC23 pour l'étude de la signalisation de APC8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDC23 essentiels à la fonction de APC8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDC23 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le APC8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le APC8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDC23. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le APC8 plasmide HDR (h) et le APC8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDC23 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDC23 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.