AP4A Hydrolase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (r): sc-437371
- Especies Diana: rat
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- AP4A Hydrolase El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (r) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico AP4A Hydrolase, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AP4A Hydrolase Anticuerpo (F-5): sc-271410
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
AP4A Hydrolase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (r) | sc-437371 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La hidrolasa de AP4A es una enzima del metabolismo de nucleótidos que hidroliza el diadenosín tetrafosfato (Ap4A), una molécula de señalización pleiotrópica tipo alarmina cuya abundancia aumenta durante el estrés celular. Al controlar el recambio de Ap4A, la enzima contribuye a la homeostasis de nucleótidos e influye en procesos posteriores vinculados con la adaptación al estrés, el equilibrio redox y la regulación de proteínas de unión a ácidos nucleicos. Las alteraciones en el metabolismo de Ap4A se han asociado con cambios en la proliferación, la señalización inflamatoria y la función neuronal, lo que hace que la hidrolasa de AP4A sea relevante para estudios mecanísticos de fenotipos cardiometabólicos, neurobiológicos e inmunorrelacionados en modelos de rata. Su actividad se intersecta ampliamente con vías que gobiernan el procesamiento de ARN/ADN y las respuestas al estrés celular, donde los segundos mensajeros dinucleotídicos actúan como moduladores.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO AP4A Hydrolase (r) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen en líneas celulares rat. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AP4A Hydrolase.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en para la investigación de la señalización de AP4A Hydrolase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de críticos para la función de AP4A Hydrolase
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido AP4A Hydrolase CRISPR/Cas9 KO (r) y el plásmido AP4A Hydrolase CRISPR/Cas9 KO (r2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus . Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AP4A Hydrolase (r) y el plásmido HDR AP4A Hydrolase (r2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.