Plasmide CRISPR/Cas9 KO AP-3β (m): sc-419135
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- AP-3β Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique AP-3β, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AP-3β Antibody (3B4): sc-517083
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO AP-3β (m) | sc-419135 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ap3b1 code la sous-unité β d’AP-3 chez la souris, un composant central du complexe protéique adaptateur-3 qui reconnaît les motifs de tri des cargos et dirige le trafic vésiculaire depuis les endosomes et le réseau trans-Golgi vers les lysosomes et les organites apparentés aux lysosomes. Le trafic dépendant d’AP-3 soutient l’acheminement des protéines membranaires, la biogenèse des organites et des voies de sécrétion régulée essentielles à la physiologie des neurones et des cellules immunitaires. L’altération de la fonction du complexe AP-3 a été associée à des défauts de tri des protéines des vésicules synaptiques et à une homéostasie endolysosomale perturbée, établissant un lien mécanistique avec les phénotypes neurodéveloppementaux et immunologiques observés lors de la perturbation de la voie AP-3.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AP-3β (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ap3b1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ap3b1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ap3b1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AP-3β.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ap3b1 pour l'étude de la signalisation de AP-3β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ap3b1 essentiels à la fonction de AP-3β
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ap3b1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le AP-3β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le AP-3β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ap3b1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le AP-3β plasmide HDR (m) et le AP-3β (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ap3b1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ap3b1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.