ANT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400679-ACT

ヒトのSLC25A4は、アデニンヌクレオチドトランスロカーゼ（ANT）をコードしており、ミトコンドリア内膜に存在するキャリアとして、マトリックスと細胞質の間でADPとATPを交換し、酸化的リン酸化および細胞のエネルギー恒常性を支えます。ヌクレオチド輸送をミトコンドリア膜電位に共役させることで、ANTは呼吸鎖の出力、代謝フラックス、ならびにミトコンドリア透過性遷移（MPT）に関連したストレス応答の調整に寄与します。ANT活性の制御異常は、神経筋系や心代謝系など高エネルギー需要組織に影響するミトコンドリア機能障害表現型と関連づけられており、SLC25A4はバイオエナジェティクスとミトコンドリア品質管理を研究する上で有用な結節点となります。この遺伝子は、ATP/ADPバランス、アポトーシス関連のミトコンドリアシグナル伝達、エネルギーストレスに対する適応応答に結び付く経路の研究で頻繁に用いられています。

ANT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC25A4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC25A4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC25A4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC25A4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC25A4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。