Particules Lentivirales d'Activation (h2) ANO4: sc-406887-LAC-2

Le gène humain ANO4 code l’anoctamine-4, un membre de la famille TMEM16/anoctamines, constituée de protéines membranaires multipasse impliquées dans le transport ionique régulé par le calcium et dans le scrambling (redistribution) des phospholipides au niveau des membranes cellulaires. L’activité d’ANO4 est liée à la régulation du potentiel de membrane, à la signalisation intracellulaire dépendante du Ca²⁺ et à des processus de remodelage qui influencent le trafic vésiculaire, l’apoptose et l’excitabilité cellulaire. Une expression altérée ou un dysfonctionnement des protéines de la famille TMEM16, dont ANO4, a été associé à des phénotypes neurologiques et à d’autres phénotypes complexes, ce qui étaye l’étude de ce gène dans les mécanismes de la neurodégénérescence et de l’homéostasie tissulaire. Les études d’édition du gène ANO4 et de perturbation fonctionnelle permettent de disséquer les voies impliquées dans des systèmes modèles, notamment via des approches d’électrophysiologie et des essais de scrambling lipidique, afin de cartographier les réseaux de signalisation en aval et les relations génotype–phénotype.

Les particules d'activation lentivirales ANO4 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ANO4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ANO4 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ANO4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ANO4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ANO4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.