Annexin XI Plasmide Double Nickase (h): sc-404879-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Annexin XI Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Annexin XI Double Nickase Plasmid (h) e il Annexin XI Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ANXA11. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Annexin XI Antibody (D-12): sc-46686
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Annexin XI Plasmide Double Nickase (h) | sc-404879-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Annexin XI Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404879-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANXA11 codifica l’annessina XI, una proteina legante i fosfolipidi in modo Ca2+-dipendente che si associa alle membrane intracellulari e partecipa al traffico di membrana, alla dinamica delle vescicole e all’organizzazione del citoscheletro. L’annessina XI è stata collegata a processi endosomiali e lisosomiali, inclusi ruoli nella funzione dei late endosomi e nelle vie correlate all’autofagia, e la sua attività di legame alle membrane è modulata dalla segnalazione del calcio. Studi cellulari implicano ANXA11 in complessi indotti dallo stress e nella dinamica dei granuli di RNA, collegandolo alla proteostasi e all’omeostasi degli organelli. Alterazioni genetiche e funzionali di ANXA11 sono state associate alla biologia di malattie neurodegenerative e neuromuscolari, rendendolo rilevante per ricerche meccanicistiche su aggregazione proteica, mantenimento assonale e risposte cellulari allo stress.
Annexin XI Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ANXA11 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ANXA11. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ANXA11. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ANXA11 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.