Plásmido Doble Nickase (h) Annexin V: sc-400836-NIC

ANXA5 codifica la anexina V, una proteína de unión a fosfolípidos dependiente de Ca²⁺ que se asocia de forma preferente con la fosfatidilserina en la monocapa interna de la membrana plasmática y se redistribuye durante la remodelación de la membrana. La anexina V participa en el tráfico de membranas regulado por calcio, la dinámica de vesículas y la organización del citoesqueleto, y se utiliza ampliamente como marcador molecular de la externalización de fosfatidilserina durante la apoptosis. A través de sus funciones en la interfaz membrana–citoesqueleto, la anexina V se vincula a vías que gobiernan la supervivencia celular, la inflamación y las superficies relacionadas con la coagulación. La expresión desregulada de ANXA5 y los fenotipos de exposición de fosfatidilserina se han estudiado en biología del cáncer, contextos autoinmunes y mecanismos asociados al sistema vascular, lo que respalda su relevancia como un nodo funcional en la señalización de estrés y muerte celular.

Annexin V El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ANXA5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ANXA5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ANXA5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ANXA5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.