Plasmide Double Nickase (h) Annexin V: sc-400836-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Annexin V correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Annexin V Double Nickase (h) et le plasmide Annexin V Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ANXA5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Annexin V Antibody (H-3): sc-74438
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Annexin V | sc-400836-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Annexin V | sc-400836-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANXA5 code l’annexine V, une protéine de liaison aux phospholipides dépendante du Ca²⁺ qui s’associe préférentiellement à la phosphatidylsérine sur le feuillet interne de la membrane plasmique et se redistribue lors du remodelage membranaire. L’annexine V participe au trafic membranaire régulé par le calcium, à la dynamique des vésicules et à l’organisation du cytosquelette, et elle est largement utilisée comme marqueur moléculaire de l’externalisation de la phosphatidylsérine au cours de l’apoptose. Par ses fonctions à l’interface membrane–cytosquelette, l’annexine V est liée à des voies impliquées dans la survie cellulaire, l’inflammation et les surfaces associées à la coagulation. Une expression dérégulée d’ANXA5 et des phénotypes d’exposition de la phosphatidylsérine ont été étudiés en oncologie, dans des contextes auto-immuns et dans des mécanismes vasculaires, ce qui soutient sa pertinence en tant que nœud fonctionnel dans la signalisation du stress et de la mort cellulaire.
Annexin V Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ANXA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ANXA5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ANXA5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ANXA5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.