Annexin V Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419117

Descripción general

Mouse Anxa5 codifica la anexina V, una proteína de unión a fosfolípidos dependiente de Ca²⁺ que se asocia con la monocapa interna de las membranas celulares y se recluta rápidamente a sitios de remodelación de membrana. La anexina V contribuye a la reparación de membranas, el tráfico vesicular y la regulación de la dinámica del citoesqueleto, y se utiliza ampliamente como marcador molecular de la exposición de fosfatidilserina durante la apoptosis. A través de sus interacciones con fosfolípidos aniónicos, la anexina V influye en procesos vinculados a la señalización de calcio y puede modular eventos de membrana relevantes para la inflamación y la coagulación. La expresión o localización alteradas de ANXA5 se han asociado con respuestas desreguladas de muerte celular y contextos de lesión tisular, lo que respalda su estudio en modelos de activación inmunitaria, biología cardiovascular y estrés de células cancerosas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Annexin V (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Anxa5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Anxa5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Anxa5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Annexin V.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Anxa5 para la investigación de la señalización de Annexin V, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Anxa5 críticos para la función de Annexin V
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Anxa5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Annexin V CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Annexin V CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Anxa5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Annexin V (m) y el plásmido HDR Annexin V (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Anxa5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Anxa5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.